Medicina molecular y genética

Expresión del factor de crecimiento básico de fibroblastos humano mediada por mini inteína en Bacillus subtilis

Abstract

Wu KC, Kwong WY, Chau JCY, Choi MC y Chung CSK

Bacillus subtilis ( B. subtilis ) es un sistema huésped ideal para la producción de proteínas homólogas. Sin embargo, la producción de proteínas heterólogas en B. subtilis es poco frecuente debido a los bajos niveles de expresión que se encuentran en la mayoría de los casos. Las inteínas, también conocidas como "intrones proteicos", que son capaces de separarse de sus parejas de fusión, se han empleado para la expresión de proteínas recombinantes en varios sistemas huéspedes, especialmente en Escherichia coli ( E. coli ), pero, sin embargo, se ha encontrado una escasez de empleo de inteínas para la expresión de proteínas en B. subtilis . En esta comunicación, demostramos que B. subtilis fue capaz de facilitar las autoescisiones entre inteína y C-exteína. Se demostró que el constructo pECBS1-H6-DnaE-bFGF, en el que se fusionaron una etiqueta 6x His (H6) y un factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) en los extremos N y C de Asp DnaE (inteína) respectivamente, es capaz de procesar la expresión intracelular y las autoescisiones de bFGF con la misma secuencia primaria que el Homo Sapiens . Además, cambiar el cultivo en matraz agitado a una pequeña escala fermentativa produjo 113 mg L ^-1 de bFGF biológicamente activo. Este enfoque de utilizar inteína Asp DnaE para la producción de proteínas heterólogas es altamente productivo y debería explorarse más a fondo para su aplicación industrial.