Medicina molecular y genética

Un ensayo in vitro para cuantificar el componente nitrosativo del estrés oxidativo.

Abstract

S Balaiya y KV Chalam

El estrés oxidativo es un factor importante que contribuye a una variedad de enfermedades neurodegenerativas y vasculares. La evaluación in vitro de una especie reactiva de óxido de nitrógeno (RNOS) oxidante principal utilizando dihidrorodamina 123 (DHR 123) es un ensayo útil para cuantificar las especies reactivas de oxígeno en una célula. DHR 123, un colorante láser no fluorescente, penetra libremente en la membrana celular y tiñe las mitocondrias. La densidad de la tinción varía con el nivel de peroxinitrito (O=NOO-); como resultado de la interacción del anión superóxido (O2-) y el óxido nítrico (NO). La fluorescencia se lee utilizando un espectrofotómetro. Las células se siembran en una placa de 24 o 96 pocillos y se agrega la solución de trabajo DHR 123 después del tratamiento apropiado. La fluorescencia se lee después de 60 minutos de incubación a 485/528 nm con un espectrofotómetro. Este ensayo es más sensible y forma un producto final estable que otros ensayos comparables y tarda 90 minutos en completarse.