Revista de bioanálisis y biomedicina

High performance liquid chromatographic tandom mass spectrometric method for the estimation of S-amlodipine in human plasma has been developed and validated using Tizanidine as internal standard. Sample process was accomplished by Liquid-Liquid Extraction technique. The processed sample was chromatographed and analysed on Phenomenex, Lux 3u Cellulose-2 (150 × 4.6) mm column using mobile phase [0.1% formic acid in water and Acetonitrile (50:50% v/v)]. S-amlodipine was chromatographed and analysed by MS detector. Amlodipine has two basic moiety (one primary and one secondary amino) so it shows pKa=9.45 with two ester linkages and one ether linkage, so it is highly lipid soluble (logP=2.22) whereas Tizanidine has two secondary amino and three tertiary amino groups, so it shows pKa=7.49. Primary amine –NH2 is aliphatic in nature in amlodipine and secondary amine –NH is in ring so it has less action of basicity. Tizanidine has secondary amine –NH is in chain which predominates the basicity (pKa=7.49) and other secondary and tertiary amines are in ring so they show less action with formic acid/ACN mobile phase. Formic acid ionizes (primary amino) –NH2 part, then (secondary amino) –NH part and then (tertiary amino) =N part. So amlodipine elutes 1st then tizanidine comes out. LogP of amlodipine is 2.22 and for tizanidine it is 1.4, so due to Formic acid-water/CAN mobile phase Amlodipine has higher retention time than tizanidine and comparison Rt. The analytical method described is valid the determination of S-amlodipine (over a range of 0.77 ng/ml to 50.98 ng/ml) using Tizanidine as internal standard in human plasma. Signals from the detector were captured in a computer and processed using Analyst software. This validation report provides results of various validation parameters.

El cáncer de mama ha sido un problema de salud significativo en términos de morbilidad y mortalidad y ha sido la segunda causa principal de muertes por cáncer en todo el mundo. Explorar y comprender los mecanismos celulares y moleculares de la tumorigénesis y progresión del cáncer de mama, así como la resistencia a los medicamentos quimioterapéuticos involucrados, será de vital importancia para avanzar en la eficacia general de la terapia del cáncer de mama. Los datos cada vez mayores demuestran altos niveles de AhR constitutivamente activo en tumores mamarios, lo que sugiere que existe un papel putativo para el AhR en la tumorigénesis de la glándula mamaria, mientras que en los últimos años se ha prestado más atención al AhR para el descubrimiento y desarrollo de nuevos fármacos. La presente revisión tiene como objetivo proporcionar una comprensión y un progreso relativamente detallados sobre el papel integrado del AhR en la tumorigénesis del cáncer de mama y en la resistencia del cáncer de mama a los medicamentos quimioterapéuticos.

La litografía de plasma es una técnica para crear superficies hidrófilas de manera selectiva en el espacio sobre materiales de silicona con un tratamiento de plasma de oxígeno. De este modo, las células pueden microestamparse dentro de las superficies modificadas, lo que permite controlar artificialmente la geometría de colonias de células individuales. La litografía de plasma convencional emplea una máscara microfabricada fotolitográficamente con la que se determina la geometría del patrón. Sin embargo, el cambio rápido de diseño a pedido del micropatrón puede ser limitado debido al tiempo y al costo asociados con la sofisticada fabricación fotolitográfica. Aquí intentamos microfabricar una máscara para litografía de plasma de una manera novedosa, rápida y de bajo costo. Se procesó una película de absorción infrarroja utilizando un láser Nd:YAG de baja potencia en un microscopio óptico para producir una máscara con geometrías de patrón arbitrarias. Nuestros experimentos indican que se obtienen rápidamente máscaras de protección de plasma con varias geometrías con una resolución espacial de varias decenas de micrones con una potencia láser inferior a 200 mW. Demostramos que las células están efectivamente micromodeladas en sustratos de silicona funcionalizados para adaptarse a la geometría de la máscara procesada con láser, lo que sugiere el potencial de esta técnica como un medio rápido, de bajo costo y bajo demanda para el micromodelado de células.

Objetivo : Determinar el papel de la noradrenalina (NE) en el daño del ADN y la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) en las células epiteliales de la superficie del ovario.

Método : Se trataron células epiteliales de la superficie ovárica inmortalizadas y no tumorígenas con NE, bleomicina y bleomicina seguida de NE. Se realizó el ensayo cometa en cada grupo de tratamiento para determinar la cantidad de roturas de cadena simple y doble inducidas por los tratamientos. Se midieron los niveles de ROS para cada grupo de tratamiento utilizando el ensayo de fluorescencia H2DCF-DA. Finalmente, se midieron las transcripciones de ARN para cada grupo de tratamiento con respecto a la expresión de genes de reparación de ADN y estrés oxidativo.

Resultados : El momento de cola medio de las células no tratadas fue significativamente mayor que el de las células tratadas con NE (p = 0,02). El momento de cola medio de las células tratadas con bleomicina fue significativamente mayor que el de las células tratadas con bleomicina seguida de NE (p < 0,01). El tratamiento con NE resultó en una generación de ROS significativamente menor que en las células no tratadas (p < 0,01). El tratamiento con NE después del tratamiento con peróxido de hidrógeno resultó en una disminución notable en la generación de ROS. Los genes asociados con el estrés oxidativo se regularon positivamente en las células tratadas con bleomicina, sin embargo, esta regulación positiva se atenuó cuando las células tratadas con bleomicina se trataron posteriormente con NE.

Conclusión : La NE está asociada con una disminución del daño del ADN y de la producción de ROS en las células epiteliales de la superficie ovárica. Este efecto es protector en presencia de bleomicina, un agente que daña la oxidación. Estos resultados sugieren un papel fisiológico adicional para la hormona del estrés NE, en la protección de las células epiteliales de la superficie ovárica contra el estrés oxidativo.

Los productos biofarmacéuticos, como los anticuerpos monoclonales, se utilizan ampliamente en la medicina clínica para diversas terapias, por ejemplo, el cáncer, las enfermedades inflamatorias y autoinmunes. La inmunogenicidad es uno de los problemas de seguridad. Esta inmunogenicidad no deseada también puede limitar el uso de productos biofarmacéuticos, en particular para el tratamiento de enfermedades crónicas que requieren tratamientos repetidos durante un período prolongado. La evaluación de la inmunogenicidad es un componente importante de la evaluación de la seguridad de los medicamentos, que actualmente se realiza mediante la estimación de los factores de riesgo. El enfoque basado en el riesgo considera tanto la probabilidad de inducción de la respuesta inmunitaria como las consecuencias clínicas esperadas. Una combinación de los dos puede dar como resultado niveles de riesgo alto, medio o bajo y dependerá del producto, el paciente y las características relacionadas con el tratamiento. Las células bien diseñadas, la formulación bien diseñada junto con un buen esquema de fabricación pueden a veces reducir algunos de los factores extrínsecos e intrínsecos y aumentar la estabilidad del producto farmacéutico. Una de las propuestas para solucionar el problema es purificar el producto farmacéutico hasta homogeneizarlo o casi homogeneizarlo, conservando su estabilidad y actividad funcional. Por otra parte, se espera que en los próximos años aparezcan en el mercado muchos medicamentos biosimilares, que se supone que son versiones económicas de los productos bioterapéuticos de marca. Lamentablemente, la fabricación de biosimilares suele ser diferente de la de los medicamentos de marca debido a la variación en los procesos de fabricación. Como resultado, dichas variaciones pueden desencadenar una inmunogenicidad no deseada. Es más probable que se requiera un enfoque basado en el riesgo, como el de los medicamentos de marca, para el desarrollo de medicamentos de proteínas terapéuticas para la evaluación de la inmunogenicidad seguida de un plan de desarrollo para la mitigación de riesgos.