Ciencia y terapia del cáncer

Validación de diferentes sistemas de expresión de tumstatina y sus actividades in vitro e in vivo

Abstract

Chandra S Boosani, Ashok K Varma y Akulapalli Sudhakar

El objetivo del presente estudio es identificar un sistema de expresión eficaz y eficiente para la purificación de la proteína antiangiogénica recombinante tumstatina. La secuencia que codifica el dominio no colagenoso carboxiterminal de la cadena β3 del colágeno tipo IV, a3(IV)NC1 (tumstatina), se aisló del tejido placentario humano y se clonó en tres vectores de expresión diferentes pET22b, pcBFT y pAcHLTA para expresarlo en bacterias, células de mamíferos y células de insectos Sf-9 respectivamente. Los perfiles de expresión y purificación de tumstatina se evaluaron mediante tinción de Coomassie e inmunotransferencia, y la eficiencia se determinó en función de los rendimientos de proteína soluble. Nuestros resultados indican que el sistema de expresión de baculovirus fue eficiente para rendimientos escalables de proteína soluble que podría purificarse en su forma biológicamente activa. Esta tumstatina expresada en baculovirus se utilizó para evaluar sus funciones antiangiogénicas y antitumorógenas, como la inhibición de la proliferación de células endoteliales, la viabilidad celular, la migración, la formación de tubos, la traducción de proteínas dependiente de la tapa y el mecanismo de señalización asociado, incluido el estudio de tumores in vivo. Nuestros enfoques evaluados utilizando un sistema de expresión de baculovirus modificado muestran una alta expresión y un alto rendimiento de tumstatina biológicamente activa, en comparación con dos sistemas de expresión, lo que indica que el sistema de expresión de baculovirus es un método ideal para la producción en masa de tumstatina soluble que se necesita para ensayos preclínicos y clínicos.