Revista de sangre y linfa

Selección y optimización de microARN de referencia exosomales circulantes para estudios cuantitativos de PCR en tiempo real de fluidos corporales porcinos

Abstract

Qiang Pu, Lin Wang, Guojun Kang, Changbao Liu, Changfeng Yang, Jia Luo y Yongfu Huang

Los miRNA exosomales circulantes liberados en todos los fluidos corporales tienen una funcionalidad y estabilidad increíbles. Su expresión está asociada con múltiples condiciones patológicas, se pueden utilizar como biomarcadores informativos al evaluar y monitorear el estado fisiopatológico del cuerpo. Sin embargo, no hay consenso sobre los miRNA de referencia para la referencia exosomal circulante y la normalización de la abundancia. El presente estudio tuvo como objetivo cuantificar 16 miRNA de referencia potenciales en diez fluidos corporales porcinos utilizando qRT-PCR. Además, su estabilidad se cuantificó combinando múltiples herramientas estadísticas de referencia, incluyendo BestKeeper, GeNorm y NormFinder. Los miRNA identificados se clasificaron exhaustivamente. El miRNA mejor clasificado se recomendó como el miRNA de referencia óptimo para la normalización de datos. Para identificar genes más estables, los fluidos corporales se asignaron en tres grupos según el punto de recolección, son in vivo (bilis, líquido de la vejiga y jugo gástrico), in vitro (calostro, leche ordinaria, semen y orina) y en la sangre (UVBP, UABP y PBS). Los miRNA de referencia exosomal circulantes óptimos más estables en los fluidos corporales fueron let-7b-5p (miR-93) en la bilis, miR-92a en el líquido de la vejiga, miR-93 en el jugo gástrico, let-7b-5p en el calostro, miR-92a en la leche y la orina ordinarias, miR-25 en el semen, let-7b-5p en UVBP, miR-25 en UABP y U6 en PBS. En general, miR-93, miR-451 (miR-92a) y miR-25 son los miRNA de referencia genuinos para la normalización de datos de qRT-PCR de fluidos corporales in vivo, in vitro y sangre, respectivamente. En todos los fluidos corporales, miR-451 fue el más estable al determinar la abundancia de miRNA en los exosomas circulantes.