Ciencia y terapia del cáncer

Cuantificación rápida de la actividad de la telomerasa mediante un protocolo mejorado de amplificación de repeticiones teloméricas en tiempo real en muestras de tejido clínico que elimina la interferencia de los inhibidores de PCR

Abstract

La telomerasa, una ribonucleoproteína con actividad de transcriptasa inversa, permite que las células humanas mantengan la estabilidad cromosómica y proliferen sin límites. Varios estudios demostraron la activación de la telomerasa en el cáncer humano, incluido el carcinoma hepatocelular. Por lo tanto, la cuantificación de la actividad de la telomerasa se ha propuesto como herramienta de diagnóstico y pronóstico. En este estudio, optimizamos un protocolo de amplificación cuantitativa de repeticiones teloméricas en tiempo real de un solo paso para la cuantificación robusta y rápida de la actividad de la telomerasa en muestras de tejido clínico. Para garantizar una cinética de PCR sin alteraciones incluso en muestras con alta actividad de telomerasa, determinamos inicialmente la dilución óptima de la muestra para nuestro ensayo. A continuación, evaluamos muestras altamente diluidas y no observamos interferencias relevantes por inhibidores tisulares de la PCR, que constituyen un problema importante al analizar muestras de tejido clínico con ensayos de punto final. Para probar nuestro ensayo en tiempo real, evaluamos muestras de hígado humano y detectamos un aumento de la actividad de la telomerasa en lesiones hepáticas malignas, mientras que el tejido hepático benigno mostró solo una actividad de telomerasa mínima. En conclusión, nuestro ensayo optimizado es adecuado para cuantificar la actividad de la telomerasa en muestras de tejido clínico sin interferencias de inhibidores de PCR. El ensayo puede emplearse para detectar la actividad de la telomerasa durante la carcinogénesis y para monitorear la actividad de la telomerasa durante la progresión y el tratamiento del cáncer.