Revista de SIDA e investigación clínica

PCR multiplex para detectar la infección por T. gondii basada en el gen B1 y el elemento repetitivo de 529 pb

Abstract

Yenisey Alfonso, Jorge Fraga, Zhaily González, Narciso Jiménez, Yainais Borrero, Raymundo Cox, Carlos Fonseca, Francisco Bandera, Virginia Capo y Dora Ginorio

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) ha supuesto una mejora significativa en el diagnóstico de la toxoplasmosis. Sin embargo, se ha evaluado una amplia variedad de dianas y primers en diferentes ensayos independientes y sólo se han realizado unos pocos estudios comparativos. Aunque el gen B1 y el elemento repetitivo 529 han sido los marcadores más estudiados, no hay ninguna conclusión al respecto.

Objetivo: El objetivo del presente estudio fue diseñar un ensayo de PCR multiplex para detectar simultáneamente estos dos marcadores en una única PCR multiplex para diagnosticar la infección por T. gondii.

Métodos: Se evaluaron iniciadores de PCR específicos dirigidos al gen B1 y al elemento repetitivo 529. Después de una cuidadosa optimización del proceso de PCR multiplex, se evaluó la sensibilidad y especificidad analíticas. La utilidad del ensayo multiplex se evaluó utilizando ADN de 8 cepas de referencia de T. gondii, correspondientes a los tres genotipos principales, y 70 muestras clínicas (sangre) de pacientes con SIDA con y sin encefalitis toxoplásmica (TE).

Resultados: Nuestros resultados preliminares muestran que el ensayo de PCR multiplex es capaz de amplificar ambos objetivos al utilizar ADN de un parásito en la reacción de PCR mixta. No se observaron reacciones inespecíficas para otros microorganismos . La sensibilidad diagnóstica del ensayo multiplex en sangre, según los criterios de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC), fue del 86,6%, mientras que la especificidad diagnóstica fue del 100%. Solo una muestra fue positiva para un marcador (gen B1) en la reacción multiplex.

Conclusión: Este método de PCR multiplex es el primer PCR multiplex que evalúa la detección de ADN de T. gondii en casos de TE y demostró ser rápido, suficientemente sensible, altamente específico y económico para realizar ensayos independientes para cada marcador, PCR en tiempo real o ensayos de PCR anidados.