Revista de SIDA e investigación clínica

Validación molecular de péptidos antimicrobianos potenciales para mejorar el diagnóstico del virus de la inmunodeficiencia humana a través de la proteína p24 del VIH

Abstract

Monray Edward Williams, Marius Tincho, Musa Gabere, Ashley Uys, Mervin Meyer y Ashley Pretorius

Objetivo: Existen varios sistemas de diagnóstico del VIH , pero se prefiere el ensayo de detección del antígeno p24 debido a su capacidad para disminuir el período de ventana para la detección del VIH. El ensayo del antígeno p24 se ha asociado con una baja sensibilidad. Los péptidos antimicrobianos (AMP) muestran un enorme potencial en el desarrollo de herramientas de diagnóstico más efectivas. El objetivo de este estudio fue diseñar AMP derivados de AMP identificados previamente, utilizando un enfoque in silico, como plantillas, con una mayor afinidad de unión prevista para la proteína p24 e implementar los AMP más adecuados en un dispositivo de punto de atención (POC) para la detección del VIH-1 y el VIH-2.

Método: En este estudio, en primer lugar, se utilizó un enfoque in silico para identificar AMP derivados que se unen al dominio N-terminal del antígeno p24 con una mayor afinidad de unión prevista. El enfoque in silico utilizó los AMP parentales como plantillas para la generación de los AMP derivados mediante mutagénesis dirigida al sitio, predicción de la estructura 3-D y estudios de acoplamiento. En segundo lugar, la unión entre los AMP sintetizados sintéticamente y el antígeno p24 del VIH se validó mediante un experimento de unión “activado/desactivado” con un dispositivo de flujo lateral (LFD) interno. Los AMP más prometedores se conjugaron con nanopartículas de oro (AuNP) y se implementaron en un LFD para detectar el VIH-1 y el VIH-2 utilizando sueros de pacientes, así como un panel de estándares internacionales del VIH (panel C10).

Resultado: Con la conjugación de AMP con nanopartículas de oro , el AMP 1 original y el AMP 1.1 derivado utilizados en combinación detectaron con mayor sensibilidad la proteína recombinante p24 y, por lo tanto, se seleccionaron para el desarrollo de un prototipo LFD para el diagnóstico del VIH. Los estándares globales de VIH-1 (C10) y VIH-2 (C10) fueron detectados con éxito por el prototipo LFD, así como por las muestras de suero infectadas con VIH.

Conclusión: Se desarrolló un prototipo de LFD sensible para VIH-1 y VIH-2 que en 15 minutos proporcionaría a los pacientes un diagnóstico preciso y sensible del VIH.