Ciencia y terapia del cáncer

Estandarización metodológica para la extracción de ADN libre en plasma de sangre periférica

Abstract

Ary Serpa Neto, Marcelo Langer Wroclavski, Jorge Luiz Freire Pinto, Sarah Rodrigues Marsicano, Pamela Oliveira Delgado, Patricia Granja Coelho, Ricardo Moreno, Viviane Aparecida Vilas Boas, Ligia Ajaime Azzalis, Virginia Berlanga Campos Junqueira, Auro Del Giglio y Fernando Luiz Affonso Fonseca

Antecedentes: Los materiales biológicos como células, ADN, ARN y proteínas pueden recuperarse de la sangre, la orina, las heces, el jugo pancreático y el esputo de los pacientes. En este trabajo describimos un método de extracción de ADN plasmático libre utilizado en nuestro laboratorio, lo comparamos con uno de los más reproducidos en la literatura y también verificamos los efectos del almacenamiento breve del plasma en la cuantificación del ADN.

Métodos: Evaluamos las concentraciones de ADN en cuatro muestras de sangre periférica una hora, un día y tres días después de la separación del plasma (parte A). Se recogió sangre con EDTA (10 mL) de cada individuo (10) y la muestra se centrifugó a 1.300 g durante 10 min. El sobrenadante se transfirió a tubos de polipropileno, con especial atención a no alterar la capa leucocítica y el plasma se microcentrifugó a 2.400 g. Se cuantificó el ADN extraído del plasma (parte B).

Resultados: La concentración media de ADN después de nuestro proceso de extracción fue similar a la encontrada en la literatura. Además, encontramos una correlación negativa consistente entre el tiempo después de la recolección del plasma y las concentraciones de ADN (r = -0,568; p = 0,022).

Conclusión: Demostramos un nuevo método para la extracción de ADN. Además, verificamos que era necesario un procesamiento rápido después de la recolección del plasma para producir resultados realistas del ADN plasmático.