Ciencia y terapia del cáncer

Evaluación in vitro del estrés oxidativo y los mecanismos apoptóticos del extracto de ajo en el tratamiento de la leucemia promielocítica aguda

Abstract

Clement G. Yedjou y Paul B. Tchounwou

Introducción: Se ha demostrado que la suplementación con ajo en la dieta es beneficiosa para los pacientes con cáncer. Recientemente, su papel farmacológico en la prevención y el tratamiento del cáncer ha recibido cada vez más atención. Sin embargo, los mecanismos por los cuales el extracto de ajo induce citotoxicidad, estrés oxidativo y apoptosis en las células cancerosas siguen siendo en gran medida desconocidos.

Objetivo: El presente estudio fue diseñado para utilizar células HL-60 como modelo de prueba para evaluar si la citotoxicidad y la apoptosis inducidas por GE en células de leucemia humana (HL-60) están mediadas o no por estrés oxidativo.

Métodos: Se trataron células de leucemia humana (HL-60) con diferentes concentraciones de GE durante 12 horas. La supervivencia celular se determinó mediante el ensayo MTT. El grado de daño oxidativo celular/tibial se determinó midiendo las concentraciones de malondialdehído (biomarcador de peroxidación lipídica) mediante espectrofotometría. La apoptosis celular se midió mediante evaluación de citometría de flujo (ensayos de anexina-V y caspasa-3) y electroforesis en gel de agarosa (ensayo de escalonamiento de ADN).

Resultados: Los datos obtenidos del ensayo MTT indicaron que GE redujo significativamente (p < 0,05) la viabilidad de las células HL-60 de una manera dependiente de la concentración. Detectamos un aumento significativo (p < 0,05) en las concentraciones de malondialdehído (MDA) en las células HL-60 tratadas con GE en comparación con el control. Los datos de citometría de flujo mostraron una fuerte relación concentración-respuesta entre la exposición a GE y las células HL-60 positivas a Annexin-V. De manera similar, se registró un aumento estadísticamente significativo y dependiente de la concentración (p < 0,05) con respecto a la actividad de la caspasa-3 en las células HL-60 que experimentaban apoptosis tardía. Estos resultados fueron confirmados por los datos del ensayo de encadenamiento de ADN que mostraron una clara evidencia de fragmentación del ADN nucleosómico en las células tratadas con GE.

Conclusión: Nuestro hallazgo indica que la citotoxicidad y la apoptosis inducidas por GE en las células HL-60 involucran la externalización de fosfatidilserina, la activación de la caspasa-3 y la fragmentación del ADN nucleosómico asociada con la formación de MDA, un subproducto de la peroxidación lipídica y un biomarcador del estrés oxidativo. En concentraciones terapéuticas, los efectos citotóxicos y apoptóticos inducidos por GE en las células HL-60 están mediados por el estrés oxidativo.