Inmunoquímica e inmunopatología

Detección inmunohistoquímica mejorada del receptor del factor de crecimiento similar a la insulina tipo 1 en tumores humanos

Abstract

Tamara Aleksic, Andrew Ross Worrall, Clare Verrill, Helen Turley, Leticia Campo y Valentine M Macaulay

Antecedentes: Se sabe que los factores de crecimiento similares a la insulina (IGF) desempeñan papeles importantes en la biología del cáncer, lo que impulsa la evaluación de fármacos dirigidos al receptor de IGF tipo 1 (IGF-1R). Sin embargo, existe una falta considerable de consenso en los estudios inmunohistoquímicos (IHC) de IGF-1R en tumores humanos, lo que confunde los intentos de evaluar la importancia predictiva y pronóstica de la expresión de IGF-1R y la localización subcelular. Las posibles fuentes de variación incluyen el uso de diferentes anticuerpos policlonales IGF-1R y métodos para IHC. Aquí, nos propusimos desarrollar un protocolo sólido de IHC de IGF-1R utilizando un anticuerpo monoclonal, adecuado para su uso en tejidos fijados con formalina e incluidos en parafina (FFPE).
Métodos: Utilizando controles que incluían muestras de tejidos FFPE y células tumorales de expresión definida de IGF-1R, utilizamos IHC y transferencia Western para comparar el anticuerpo policlonal n.º 3027 con los monoclonales n.º 9750 y n.º 14534 (Cell Signaling Technology).
Resultados: En comparación con el #3027, los monoclonales mostraron una discriminación superior entre células con niveles altos de IGF-1R y células deficientes de IGF-1R en la inmunohistoquímica manual, la señal generada por el #9750 reflejó diferencias en la expresión de IGF-1R detectada por inmunotransferencia. En los tejidos, el IGF-1R detectado por el #14534 se asoció predominantemente a la membrana plasmática, mientras que el #9750 detectó el IGF-1R en las membranas plasmáticas, el citoplasma y el núcleo de los cánceres de próstata y riñón, recapitulando las apariencias que describimos utilizando lotes anteriores del #3027 y reflejando las localizaciones subcelulares informadas utilizando otras técnicas. El uso del #9750 y el #14534 en un sistema de tinción automática mostró una diferenciación adecuada de células con niveles altos y bajos de IGF-1R, pero no recapituló las apariencias de los tejidos teñidos manualmente. Proporcionamos un protocolo detallado para el método manual preferido utilizando el #9750.
Conclusión: La estandarización de la IHC del IGF-1R promoverá la comprensión del papel del IGF-1R en la biología tumoral y su potencial como candidato a biomarcador pronóstico y predictivo.