Ciencia y terapia del cáncer

Elevación de alto nivel de la expresión transgénica mediante el efecto conjunto de la tricostatina A y la D-glucosa en una línea celular derivada de mesotelioma pleural maligno resistente a la expresión transgénica basada en vectores de adenovirus

Abstract

Junko Mori*, Yujiro Arao, Tomoyuki Honda y Hiromi Kumon

Objetivo: El mesotelioma pleural maligno (MPM), un tumor localmente invasivo, se trata con una combinación de terapias quirúrgicas, radioterapéuticas y médicas, pero la eficacia del tratamiento sigue siendo insuficiente. Se ha intentado la terapia génica para el MPM para mejorar el pronóstico de la enfermedad, pero aún no ha alcanzado un nivel práctico. Una de las barreras para la terapia génica del MPM es la resistencia de las células MPM a la expresión de transgenes. Por lo tanto, el propósito de este estudio fue encontrar técnicas para lograr una expresión transgénica de alto nivel en células MPM resistentes a la expresión transgénica.

Métodos: Evaluamos dos líneas celulares MPM, NCI-H28 (H28) y NCI-H2052 (H2052), para determinar su resistencia a la expresión transgénica, y luego examinamos si la expresión transgénica en las células H2052 resistentes se mejoraba al tratar las células con D-glucosa, un inhibidor de la quinasa 1/2 regulada por señales extracelulares LY3214996 (LY), y un inhibidor de la histona desacetilasa tricostatina A (TSA), que se ha informado que aumentan la expresión transgénica. La expresión transgénica celular se evaluó mediante un ensayo de gen reportero en el que se insertó un gen de proteína fluorescente verde mejorada (EGFP) controlado por el promotor temprano inmediato del citomegalovirus humano (CMV) en las células utilizando un vector de adenovirus humano (ADV). El grado de expresión del gen EGFP se examinó mediante ensayo fluorométrico, microscopía de fluorescencia y cuantificación de EGFP mediante ELISA.

Resultados: La intensidad de fluorescencia en las células H2052 fue solo el 13,9% de la de las células H28. El tratamiento con D-glucosa de las células H2052 después de la transducción (postratamiento) aumentó la intensidad de fluorescencia en las células H2052 solo 1,9 veces. El tratamiento con LY de las células H2052 antes de la transducción (pretratamiento) aumentó la intensidad de fluorescencia en las células solo 1,7 veces. El pretratamiento con TSA aumentó la intensidad de fluorescencia en las células H2052 hasta 6,9 veces, casi al mismo nivel que en las células H28. Cuando las células H2052 pretratadas con TSA fueron posttratadas con D-glucosa, la intensidad de fluorescencia en las células H2052 aumentó al 400% de la de las células H28. La expresión elevada del gen EGFP por el efecto conjunto de TSA y D-glucosa también se confirmó mediante microscopía de fluorescencia y cuantificación de EGFP por ELISA.

Conclusión: Se sugirió que el pretratamiento con TSA podría eliminar la resistencia a la expresión transgénica de las células MPM y el efecto conjunto de TSA y D-glucosa podría mejorar considerablemente la expresión transgénica en las células MPM resistentes.