Revista de SIDA e investigación clínica

Un ensayo rápido y autoconfirmante para el VIH: detección simultánea de anticuerpos anti-VIH y ARN viral

Abstract

Zongyuan Chen, Hui Zhu, Daniel Malamud, Cheryl Barber, Yhombi Yvon Serge Ongagna, RubinaYasmin, Sayli Modak, Malvin N. Janal, William R. Abrams y Richard A. Montagna

Objetivo: Desarrollamos un sistema de microfluidos para detectar simultáneamente anticuerpos anti-VIH y ARN viral en la misma muestra con el fin de satisfacer dos criterios de diagnóstico importantes, especialmente en entornos con recursos limitados. En primer lugar, el sistema puede detectar la infección aguda por VIH y permitir la confirmación inmediata de un resultado de detección seropositiva mediante la detección del ARN del VIH. También aborda la conocida "ventana de seroconversión" durante la infección temprana por VIH, cuando los anticuerpos aún no son detectables y las cargas virales están en su nivel más alto.

Métodos: Primero desarrollamos y optimizamos dos ensayos manuales separados para la detección de anticuerpos anti-VIH y ARN viral del huésped y luego los convertimos al sistema microfluídico. Optimizamos un ensayo serológico disponible comercialmente para que se ejecute dentro del dispositivo microfluídico mientras incorporamos el ensayo LAMP isotérmico para detectar la presencia de ARN viral. El dispositivo microfluídico y la instrumentación se desarrollaron para realizar simultáneamente ambos ensayos sin ninguna intervención del usuario .

Resultados: El sistema finalizado consta de un dispositivo desechable CARD microfluídico moldeado por inyección y laminado en película y un instrumento portátil controlado por software, que juntos pueden realizar automáticamente todos los pasos de ambos ensayos sin ninguna intervención del usuario después de la carga inicial de muestras y reactivos. El cartucho CARD microfluídico tiene múltiples microcanales, válvulas, bombas y reservorios, que realizan el inmunoensayo, aíslan el ARN viral para su detección mediante purificación basada en perlas magnéticas y amplificación isotérmica mediada por bucle de transcriptasa inversa (RT-LAMP). El sistema microfluídico pudo detectar anticuerpos anti-VIH del huésped y ARN viral en una muestra de sangre o saliva.

Conclusión: La capacidad de detectar anticuerpos y confirmar simultáneamente un resultado seropositivo de ARN del VIH proporciona a los trabajadores de la salud una evaluación completa y precisa del estado de infección de un paciente en las primeras etapas de la enfermedad y representa una herramienta importante para los enfoques de "Probar y tratar" y "Tratamiento como prevención" para controlar la epidemia del VIH .